【摘要】 目的 观察大鼠局灶脑缺血外周血及脑组织一氧化氮的变化及脑梗通对NO表达的影响。方法 采用血管内栓线阻断法建立右侧大脑中动脉局灶性脑缺血（MCAO）模型，应用荧光分光光度法测定NO的表达。结果 大鼠MCAO后4h，血浆和缺血侧脑组织NO仍明显低于假手术组，至MCAO后24h，血浆和缺血侧脑组织NO含量已有升高，并接近假手术组水平;脑梗通可升高大鼠MCAO后4h、24h血浆和脑组织中的NO含量，且有时相差异，至24h时血浆和脑组织中的NO含量均明显高于模型组，并接近假手术组。结论 脑缺血早期NO表达减少，脑梗通口服液能有效升高NO的表达，可能是其治疗急性脑梗塞的重要药理机制之一。

关键词 脑缺血一氧化氮 脑梗通

一氧化氮在脑梗塞中的作用具有双重性，一般认为，在低浓度时，起着扩张血管、抑制血小板聚集、抑制细胞浸润、粘附等生理作用，从而保护神经细胞，而在高浓度时，则产生神经细胞损伤的毒性作用。我们通过临床研究已证实脑梗通口服液治疗急性脑梗塞患者具有较好的疗效。本研究观察了大鼠大脑中动脉阻塞后NO的表达变化及中药脑梗通对其影响，以探讨脑梗通治疗急性脑梗塞的作用机制。

1 材料与方法

1.1 动物及分组 选用Wistar二级雄性大鼠，体重250g～350g（由中国生物制品鉴定所提供）。将动物随机分为3组:假手术组、模型组、脑梗通组，模型组、脑梗通组又分MCAO后4h组和24h组两组，每组10只大鼠。

1.2 给药方法 按人与大鼠体表面积换算公式计算，脑梗通组，给于脑梗通口服液（1ml/100g·d，本院药学部制剂室提供）;模型组，给予生理盐水（1ml/100g·d）。以上各组除假手术组外，均按每日剂量要求分上下午2次灌胃，连续5d后造模。

1.3 大鼠急性局灶性脑缺血模型的制备及鉴定 采用血管内拴线阻断法阻断右侧大脑中动脉 ［1］ 。假手术组同样进行麻醉、皮肤切开、血管分离后，不夹闭血管及插入栓线，直接缝合皮肤。大脑中动脉血管内栓线造成右侧Horner’s综合征，参照Zea Longa评分法 ［2］ ，于大鼠清醒后进行评分，分五级0～4分。0分:无神经系统损害症状;1分:不能完全伸直左前爪;2分:向左侧转圈;3分:行走时向左侧倾斜;4分:不能自发行走。评分在2分以上的大鼠用于本实验。

1.4 血浆及脑组织NO测定 大鼠达到缺血时限后，断头缺血1ml，放入肝素抗凝试管内，并在低温下（0℃）迅速取所 需脑组织（内侧皮层、颞皮层、海马）精确称重，以1:10的比例加入生理盐水制成脑组织匀浆液。采用荧光分光光度法 ［3］ 测定血浆及脑组织中NO含量，仪器采用RF-5000型荧光分光光度计。

1.5 统计学方法 全部数据均以X±s表示，两组间均数比较采用t检验。

2 结果

2.1 各组脑缺血后不同时相血浆NO含量变化 见表1。

表1 各组脑缺血后不同时相血浆NO含量

注:与假手术组比: △ P

由表1可见，大鼠在MACO后4h血浆NO含量显著低于假手术组（P0.05）。脑梗通组在MACO后4h血浆NO含量亦降低，但P>0.05;至MACO后24h时，脑梗通组的NO含量升高差异有显著性（P

2.2 各组脑缺血后不同时相患侧脑组织NO含量变化 见表2。

表2 各组脑缺血后不同时相脑组织NO含量

注:与假手术组比: △ P

由表2可见，各组脑组织中NO含量均低于假手术组，但仅模型组在MCAO4h时显著降低（P

3 讨论

急性脑梗塞属中医“中风”范畴，由风、火、痰、瘀、虚等病理因素引起气血逆乱、瘀血阻滞经络而发病。急性期以邪气盛实为主，治疗重心当以治标为主，以顿挫邪势。我们通过观察研究认为，引起瘀血阻滞经络的成因甚多，如不加以分析，而是概念化的活血化瘀往往可影响疗效。脑梗通口服液由川芎、大黄、水蛭、天麻、白蒺藜等药组成，具有通腑化痰、活血通络之效，我们通过临床研究已证实脑梗通治疗急性脑梗塞患者具有较好的疗效 ［4］ 。一氧化氮在脑梗塞中的作用具有双重性，一般认为，在低浓度时，起着扩张血管、抑制血小板聚集、抑制细胞浸润、粘附等生理作用，从而保护神经细胞，而在高浓度时，则产生神经细胞损伤的毒性作用。在急性局灶性脑缺血早期，由内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthas一氧化氮含量，eNOS）合成的NO具有神经细胞保护作用，由神经元型一氧化氮合酶（neuronal nitric oxide synthas天然气报警器，nNOS）合成的NO主要认为参与了早期的缺血性神经元损伤，而在急性局灶性脑缺血中后期，由诱生型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synˉthas，iNOS）合成的NO具有神经毒性作用，主要参与迟发性神经元损伤 ［5］ 。

本实验研究发现，大鼠MCAO后4h，血浆和缺血侧脑组织（内侧皮层、颞皮层、海马）NO仍明显低于假手术组，至MCAO后24h，血浆和缺血侧脑组织NO含量已有升高，并接近假手术组水平。脑梗塞早期NO水平降低的原因考虑有:①脑组织长时间缺血使NO合成的底物氧和精氨酸供应障碍。②缺血时血管内皮受损及神经元损伤使NO合成受到影响。目前认为，脑梗塞早期NO的增高更为重要 ［6］ 。 由于脑梗塞早期NO浓度的低下，使其不能发挥对神经细胞的保护作用，导致脑梗塞早期神经细胞的损伤。另外，实验显示血浆NO和脑组织NO水平呈同步变化，表明通过监测血浆中NO含量可基本估计脑组织中NO含量的变化，对临床研究有一定指导意义。

实验研究显示，脑梗通可升高大鼠MCAO后4h、24h血浆和脑组织中的NO含量，且有时相差异，至24h时血浆和脑组织中的NO含量均明显高于模型组，并接近假手术组。说明脑梗通可能通过调节NO的变化来发挥作用，是其治疗急性脑梗塞的药理机制之一。本研究未检测NOS的活性变化，但从时间推测，脑梗通可能是通过提高脑梗塞早期eNOS活性，从而发挥NO的神经细胞保护作用。脑梗通调控NO表达的机制可能为:（1）脑梗通通过活血化瘀、通腑化痰作用，改善微循环，改善循环中及脑组织的供血供氧，使NO合成的底物得到一定恢复。（2）脑梗通具有清除氧自由基、降低过氧化脂质的作用 ［4］ ，从而可能进一步抑制了NO合成后的降解。

参考文献

1 杨世芳，闵宝珍，周锡英，等.大鼠局部脑缺血再灌流的实验研究.临床神经病学杂志，1997，10（4）:204-206.

2 Zea longa，Weinstein PR，Carlson S一氧化氮含量，et al.Reversible middle cerebral artery occlusion Without craniectomy in rats Stroke一氧化氮含量，1989，20:84-91.

3 王吉村，莫简，孙长凯，等.组织及组织液中一氧化氮的荧光分光光度法测定.第四军医大学学报，1995乙醇检测仪，16（6）:463-464.

4 黄柳华，李求兵，张树益，等.脑梗通1、2口服液治疗老年急性脑梗塞142例临床观察.实用中西医结合杂志，1998，11（4）:319-320.

5 江文，黄远桂.一氧化氮合酶与局灶性脑缺血.中风与神经疾病杂志，1998，15（6）:375-377.

6 钟慈声，孙安阳.一氧化氮的生物医学.上海:上海医科大学出版社，1997，199.

作者单位:100029北京中日友好医院

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